Analiz sertifikası (COA) nasıl okunur?

Analiz sertifikası (Certificate of Analysis, COA), belirli bir üretim partisinin laboratuvarda nasıl test edildiğini ve hangi sonuçları verdiğini gösteren belgedir. İyi bir sertifika üç soruyu yanıtlar: Doğru molekül mü? Ne kadar saf? Tozun ne kadarı gerçekten peptit?

1. 1

   Parti numarası

   Belgedeki numara, elinizdeki flakonun etiketindekiyle aynı olmalı. Her parti için ayrı analiz yapılır; tüm ürünler için tek bir belge dolaşıyorsa bu bir uyarı işaretidir.

2. 2

   HPLC saflığı

   Kromatogramdaki ana tepenin, tüm tepelerin toplam alanına oranıdır. Numunedeki peptit dışı maddeleri değil, peptit benzeri safsızlıkları ölçer. Belgede kromatogramın kendisi de yer almalıdır.

3. 3

   Kütle spektrometrisi

   Kimliği doğrular: ölçülen kütle, dizinin teorik kütlesiyle örtüşmelidir. Bir toz %99 saf olup yine de yanlış molekül olabilir; bunu ancak kütle analizi gösterir.

4. 4

   Peptit içeriği

   Tozun ağırlıkça ne kadarının gerçekten peptit olduğunu söyler. Kalanı bağlı su ve karşı iyonlardır (asetat, TFA gibi). Saflıkla karıştırılmamalıdır; %99 saf bir toz ağırlıkça %70 ile %90 arası peptit içerebilir.

5. 5

   Analizi kim yaptı?

   Laboratuvarın adı, analiz tarihi ve imza belli olmalıdır. Bağımsız bir laboratuvarın raporu, üreticinin kendi raporundan daha güçlü bir kanıttır.

HPLC nedir?

Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), karışımdaki molekülleri bir kolondan geçerken ayrıştırır. Peptitlerde çoğunlukla ters faz HPLC kullanılır ve moleküller ultraviyole ışıkta, genellikle 214 ile 220 nm dolayında ölçülür. Ekranda her madde bir tepe olarak görünür; saflık, ana tepenin alanının tüm tepelerin toplam alanına oranıdır.

Sınırlılığı da vardır: ana tepeyle aynı anda çıkan bir safsızlık ayırt edilemeyebilir. Ultraviyolede görünmeyen maddeler (su, tuzlar) ise hiç ölçülmez. Bu yüzden HPLC tek başına yeterli değildir.

Kütle spektrometrisi nedir?

Kütle spektrometrisi (MS) moleküllerin kütlesini ölçer ve kimliği doğrular. Elektrosprey yönteminde peptitler birden fazla yük taşıyabildiği için spektrumda aynı molekül farklı noktalarda görünebilir; örnekteki 710,4 ve 1419,7 değerleri aynı BPC-157 molekülünün iki farklı yüklü halidir. Ölçülen kütle, dizinin teorik kütlesiyle örtüşmelidir.

Saflık ile içerik aynı şey değil

Sentetik peptitler çoğunlukla bir karşı iyonla birlikte tuz halinde bulunur. Üretimde kullanılan trifloroasetik asitten gelen TFA ya da sonradan değiştirilen asetat bunların en yaygınlarıdır. Toz ayrıca bir miktar su tutar. Net peptit içeriği, amino asit analizi ya da azot analiziyle ölçülür ve çoğu zaman %70 ile %90 arasındadır.

Kırmızı bayraklar

• Parti numarası yok ya da flakonun üzerindekiyle eşleşmiyor.
• Kromatogram ve spektrum görüntüsü yok; yalnızca rakamlar yazılmış.
• Her ürün ve her partide aynı, yuvarlak saflık değeri (örneğin hep %99,9).
• Laboratuvar adı, analiz tarihi ya da imza yok; laboratuvar doğrulanamıyor.
• Ölçülen kütle, teorik kütleden belirgin şekilde farklı.
• Analiz tarihi, ürünün üretiminden önceye ya da çok eskiye ait.

Bağımsız test

Üreticinin kendi laboratuvarında hazırlanan bir rapor da değerlidir; ancak en güçlü kanıt, ISO/IEC 17025 gibi bir akreditasyona sahip bağımsız bir laboratuvarın aynı partiden aldığı numuneyle yaptığı analizdir.